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　　A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細胞描述

　　細胞培養到穩定期后細胞表現出長高的肌激酶和肌氨酸磷酸激酶活性(CPK)。細胞分裂終止后合成骨肉型CPK。

　　細胞特性

　　1）來源：大鼠胸大動脈

　　2）形態：成纖維細胞，貼壁生長

　　3）含量：>1x106細胞數

　　4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5）用途：僅供科研使用。

　　運輸和保存

　　干冰運輸及復蘇好存活細胞

　　（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

　　（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

　　細胞接收后的處理

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

　　3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的*培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

　　4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后第，一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備DMEM（含NaHCO31.5g/L）基礎培養基88%

　　優質胎牛血清10%

　　GlutaMAX-1谷，氨，酰，胺(推薦：1%

　　P/S青，霉，素-鏈，霉，素1%

　　2）該細胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養基中生長良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/LNaHCO3）培養基培養細胞時需要提高CO2濃度（7%-10%）。

　　3）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰，蛋，白，酶-0.53mMEDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。