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Prominence nano液相色譜儀

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蛋白組學(xué)分析,是蛋白質(zhì)分析的一項非常重要的技術(shù),一般會使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS

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蛋白組學(xué)分析,是蛋白質(zhì)分析的一項非常重要的技術(shù),一般會使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS。許多蛋白質(zhì)和肽極其微量,需要質(zhì)譜儀的高靈敏度檢測才能發(fā)現(xiàn),而這就需要一個非常穩(wěn)定的前端HPLC支持此微量檢測。

Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng),可在納升流量下進行精準(zhǔn)流速的溶劑輸送。按照應(yīng)用不同,可以配置成1D和2D系統(tǒng)。

Prominence nano具備納升流速下的高保留時間重復(fù)性,非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點。

基本性能

· 納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸
· RFC系統(tǒng)大大降低溶劑消耗
· 低容量納升閥---保證了低的系統(tǒng)死體積
· 高靈敏度分析

納米輔助控制軟件的直觀操作

· 圖形界面直觀操作
· 可視化監(jiān)控儀器運行狀態(tài)
· 二維參數(shù)的便捷設(shè)置

蛋白質(zhì)組分析的應(yīng)用

· 高保留時間重復(fù)性
· 二維LC的高分辨率

納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸

LC-20AD nano采用了新的RFC技術(shù),可對每一個泵進行獨立的流速控制,在納升流速下保證好的流量精度。的RFC系統(tǒng)是由高精度的納升流速感應(yīng)器控制,確保在任何時間精準(zhǔn)的流速測量。同時,流量傳感器配置了精確的溫度控制機制,以減少不確定的環(huán)境因素對溶劑輸送的影響。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的流速穩(wěn)定性,在300nL/min時候保留時間重復(fù)性的RSD小于0.2%。

RFC系統(tǒng)的原理


泵內(nèi)配置了一個流速傳感器,可持續(xù)監(jiān)測泵輸出的納升流速。為了保證流速在設(shè)定的范圍內(nèi),采用反饋控制模式,傳感器的監(jiān)測到真實流速后可以自動調(diào)整分流比例,從而保證流速的準(zhǔn)確性。另外,分流后的流動相在混合前就經(jīng)過回流管路回到溶劑瓶,不會浪費溶液。


低溶劑消耗


Prominence nano

RFC系統(tǒng)可確保每個泵輸出的溶劑分流后又回到流動相瓶中。就算在高壓梯度分析中,兩種溶劑在分離后并不會像廢棄物一樣排出,從而降低溶劑消耗并減少對環(huán)境的影響。


Prominence nano

FCV納升閥,低死體積


Prominence nano
FCV nano

FCV納升閥體積為25nL,在納升范圍內(nèi)幾乎不會展寬。在納升LC使用捕集柱進樣和二維系統(tǒng)中,F(xiàn)CV 納升閥是的。FCV 納升閥通過使用強化的定子和聚醚醚酮的轉(zhuǎn)子,可以大大降低樣品的吸附,同時獲得很好的耐用性。


高靈敏度分析


Prominence nano
SIL-20AC

SIL-20AC的直接進樣功能與FCV納升閥的低擴射性能相結(jié)合可實現(xiàn)微量體積樣品的進樣分析。FCV納升閥后連接的捕集柱可以對進樣的樣品進行捕集濃縮,從而實現(xiàn)高靈敏度分析。而且,SIL-20AC被為交叉污染的自動進樣器,這些特征都可以滿足高靈敏度MS分析的要求。


2維LC的輔助控制軟件

輔助控制軟件可對2維LC進行便捷設(shè)置,在軟件圖形界面上可輕松對2維HPLC的進行復(fù)雜梯度編程,設(shè)定流速等,然后生成方法文件并下載至儀器中進行控制,而圖形化的流路圖和梯度曲線代表當(dāng)前狀態(tài)。簡便的設(shè)置可避免單獨使用LC控制軟件帶來的一系列的操作問題。

Prominence nano

Prominence nano 2D系統(tǒng)在線的結(jié)合了離子交換和反向色譜模式(如下圖所示),每種色譜模式都獨立運行,兩種模式的結(jié)合可進行的分離。Prominence nano 2D系統(tǒng)可與配備Nano ESI源的LCMS系統(tǒng)聯(lián)用進行濕法蛋白組學(xué)分析,也可以與點靶儀和MALDI-TOF質(zhì)譜聯(lián)用進行干法蛋白組學(xué)分析。

Prominence nano

易操作的一維體系


Prominence nano
Nano-Assist一維LC設(shè)置圖

1D 納升LC系統(tǒng)對于確認(rèn)SDS PAGE分離前的蛋白質(zhì)十分有效,1D系統(tǒng)只需要非常簡單的操作就可以實現(xiàn)。當(dāng)然,輔助控制軟件在1D和2D系統(tǒng)中使用都是十分方便的。


高保留時間重復(fù)性

蛋白質(zhì)組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異,而樣本中又存在許多特征相似的多肽,對保留時間的重復(fù)性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復(fù)性可保證蛋白質(zhì)組分析的高精數(shù)據(jù),配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時間重復(fù)性。

Prominence nano
牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性

2維 LC的高分辨率


Prominence nano
牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性

在蛋白質(zhì)組學(xué)分析時,單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量;所以,為了實現(xiàn)復(fù)雜樣品的分離,需要進行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進行2D分析,結(jié)合陽離子交換和反相模式,為蛋白質(zhì)組學(xué)分析提供所需的核心技術(shù)。下圖為200fmol酵母蛋白質(zhì)的分析圖,1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個組分,2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。


分析條件

一維

PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)

流動相

甲酸銨緩沖液
濃度STEP梯度

流速

40 nL/min

捕集柱

(5 mmL.×300 ?m I.D.)
L-column (micro)

捕集時長

5分鐘

脫鹽溶劑

水/蟻酸=100/0.1

脫鹽流速

L/min

脫鹽時長

5分鐘

2維

PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.)

流動相

梯度洗脫
A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)

流速

600nL/min

溫度

溫度

檢測

LCMS-IT-TOF

樣本

酵母蛋白中的蛋白
(相當(dāng)于200 fmol的)

* 分別利用1維和2維中不同類型的柱體進行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下,分離或檢測方法由于使用的移動相分離模式或類型之間的相互作用,可能會有一些限制。

連接MALDI-TOFMS使用


Prominence nano

Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過nano ESI接口連接LCMS使用,還可連接到配有自動點靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準(zhǔn)確分析MALDI靶的每個色譜峰,需要LC能夠在1nL到1µL范圍之內(nèi)精確控制流速,Prominence nano系統(tǒng)的滿足了此需要。


Prominence nano
酶解BSA樣品的UV色譜圖(500fmol)

分析條件

檢測器

UV220 nm

MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
(250 mmL. × 100 µm I.D.)

流動相

1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脫

流速

1 µL/min

溫度

環(huán)境溫度

捕捉柱

ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)

點靶間隔

12 秒的點斷
每點液體:200nL(不包括基質(zhì))



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