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脈沖場電泳是一種分離大分子DNA的方法，脈沖電泳儀能選擇0°-360° 內(nèi)的任何脈沖角度， 用一個(gè)系統(tǒng)就能完成染色體和質(zhì)粒DNA 的快速分離。 通過逐漸改變電泳過程中的轉(zhuǎn)換時(shí)間來轉(zhuǎn)換時(shí)間梯度，從而增加片段遷移率。 另外， 每個(gè)載體均可設(shè)置電壓及轉(zhuǎn)換時(shí)間。 一個(gè)電泳最多能融合8 個(gè)不同的階段，以優(yōu)化樣品中亞組分片段的分離。
脈沖電泳儀工作的原理
脈沖電泳儀采用旋轉(zhuǎn)脈沖場，電極安置在轉(zhuǎn)子上，由轉(zhuǎn)子帶動電極以任意角度旋轉(zhuǎn)，產(chǎn)生均一的重復(fù)電場。在脈沖場凝膠電泳中，電場不斷在兩種方向(有一定夾角，而不是相反的兩個(gè)方向)變動。由于DNA分子帶有負(fù)電荷，會朝正極移動。相對較小的分子在電場轉(zhuǎn)換后可以較快轉(zhuǎn)變移動方向，而較大的分子在凝膠中轉(zhuǎn)向較為困難。因此小分子向前移動的速度比大分子快，最終達(dá)到分離的目的。
脈沖電泳儀*新穎的脈沖場設(shè)計(jì)，由轉(zhuǎn)子帶動電極以任意角度旋轉(zhuǎn)，產(chǎn)生均一的重復(fù)電場，分離范圍大，可分離長達(dá)8Mb的DNA片段。同時(shí)具有較高的分辨率高，可輕易地分辨線性和環(huán)狀的DNA，對大的環(huán)狀DNA分離效果更佳。
脈沖電泳儀的基本操作
脈沖電泳儀的使用分為電泳前與電泳后，電泳前半小時(shí)需要檢查冷凝系統(tǒng)，確認(rèn)管道連接密閉，不漏氣。然后在電泳槽內(nèi)加入約2.2升合適的電泳液。 最后接通主機(jī)和冷凝泵電源，開啟主機(jī)開關(guān)，主機(jī)自檢結(jié)束后，開啟冷凝系統(tǒng)開關(guān)按“set temp”鍵調(diào)節(jié)需要的電泳溫度，按“actual temp”顯示實(shí)際溫度。調(diào)節(jié)泵的速度為“100”左右。
半小時(shí)后操作者需要將加好樣的凝膠連同底座一起放入電泳槽內(nèi)的黑色方框內(nèi)，并保證電泳液超過膠面1~2mm，蓋好電泳槽蓋，將冷凝泵速度調(diào)節(jié)至“50”，以防凝膠被沖走。 并且在主機(jī)上設(shè)置電泳程序，按“start”鍵，即可進(jìn)行電泳。此時(shí)可觀察到電泳槽內(nèi)電極開始出現(xiàn)氣泡。
電泳開始后，“high voltage”燈亮，此時(shí)切不可打開電泳槽蓋進(jìn)行操作，以免發(fā)生觸電危險(xiǎn)。 電泳結(jié)束后，“high voltage”燈滅。先依次關(guān)掉冷凝系統(tǒng)，主機(jī)開關(guān)，然后可取出凝膠，最后放出使用過的電泳液。若長時(shí)間不用，需用蒸餾水沖洗電泳液循環(huán)系統(tǒng)，晾干。
目前，脈沖電泳儀已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到生物、微生物種系鑒定、分子流行病學(xué)的研究、基因組文庫或大片段質(zhì)粒研究、基因物理圖譜繪制以及DNA的損傷和修復(fù)等研究當(dāng)中。該設(shè)備的電泳槽、脈沖角度、時(shí)間轉(zhuǎn)換梯度等要素都是選擇產(chǎn)品時(shí)的重要參考因素。
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