流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量,并可以根據預選的參量范圍把特定的細胞亞群從中分選出來。
流式細胞儀主要由四部分組成。它們是:流動室和液流系統、激光源和光學系統、光電管和檢測系統、計算機和分析系統。
流動室和液流系統
流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學玻璃、石英等透明、穩定的材料制作。設計和制作均很精細,是液流系統的心臟。樣品管貯放樣品,單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔,包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩液,一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用,被檢測細胞被限制在液流的軸線上。流動室上裝有壓電晶體,受到振蕩信號可發生振動。
激光源和光學系統
經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發才能發出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光;激光器又以氬離子激光器為普遍,也有配和氪離子激光器或染料激光器。光源的選擇主要根據被激發物質的激發光譜而定。汞燈是常用的弧光燈,其發射光譜大部分集中于300~400nm,很適合需要用紫外光激發的場合。氬離子激光器的發射光譜中,綠光514nm和藍光488nm的譜線*,約占總光強的80%;氪離子激光器光譜多集中在可見光部分,以647nm較強。免疫學上使用的一些熒光染料激發光波長在550nm以上,可使用染料激光器。將有機染料做為激光器泵浦的一種成份,可使原激光器的光譜發生改變以適應需要即構成染料激光器。
光電管和檢測系統
經熒光染色的細胞受合適的光激發后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。光電倍增管(PMT)最為常用。PMT的響應時間短,僅為ns數量級;光譜響應特性好,在200~900nm的光譜區,光量子產額都比較高。光電倍增管的增益從10到10可連續調節 ,因此對弱光測量十分有利。光電管運行時特別要注意穩定性問題,工作電壓要十分穩定,工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;最大陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進行暗適應處理,并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT,因為光譜響應特性不同,不宜互換。也有用硅光電二極管的,它在強光下穩定性比PMT好。
從PMT輸出的電信號仍然較弱,需要經過放大后才能輸入分析儀器。流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關系,稱為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內變化的信號以及代表生物學線性過程的信號,例DNA測量等。另一類是對數放大器,輸出信號和輸入信號之間成常用對數關系。在免疫學測量中常使用對數放大器。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性、陽性和強陽性三個亞群,它們的熒光強度相差1~2個數量級;而且在多色免疫熒光測量中,用對數放大器采集數據易于解釋。此外還有調節 便利、細胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優點。
計算機和分析系統
經放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數是和電信號的脈沖高度相對應的,也是和光信號的強弱相關的。對應道數年縱坐標通常代表發出該信號的細胞相對數目。多道分析器出來的信號再經模-數轉換器輸往微機處理器編成數據文件,或存貯于計算機的硬盤和軟盤上,或存于儀器內以備調用。計算機的存貯容量較大,可存貯同一細胞的6~8個參數。存貯于計算機內的數據可以在實測后脫機重現,進行數據處理和分析,最后給出結果。除上述四個主要部分外,還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。
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