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色譜柱的使用和維護方法

   2019年01月23日 15:42  
  【中國儀器網 維修保養】色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。當然,色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。
 
  1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
 
  2、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然,流動相使用前必須經脫氣和過濾處理。
 
  3、一般說來色譜柱不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
 
  4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質被溶解,壓力升高是需要更換預柱的信號。
 
  5、避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內,需要對樣品進行預處 理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
 
  6、經常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50~75ml。
 
  7、避免使用高粘度的溶劑作為流動相;如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢柱子沖洗干凈。
 
  8、進樣樣品要提純。
 
  9、嚴格控制進樣量,不要超載。
 
  10、每天分析測定結束后,都要用適當的溶劑來清洗柱,好用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完后應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用,應每隔4~5天開機沖洗15分鐘。
 
  11、大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2-7.5,盡量不超過該色譜柱的pH范圍。
 
  12、按說明書保存色譜柱,禁止講緩沖液留在柱內過夜,注意反相柱不能用純水長時間沖。
 
  13、不建議拆開柱子,自己更換填料。

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