分析方法
(1)定性方法:
不同分子結構的各種熒光物質,具有不同的激發光譜(吸收光譜)和熒光光譜,這是分子熒光分析的定性依據。
在一定實驗條件下,用熒光分光光度計作試樣和標樣的激發光譜和熒光光譜,然后比較它們的光譜圖,即可鑒定試樣物質。
(2)定量方法:
1.工作曲線法
先配一系列不同濃度的標準溶液并分別測定其熒光值,然后將減去試劑空白熒光值的標準溶液熒光值與其相應濃度作圖,即其工作曲線。
根據試液及試液空白熒光值,在此曲線上即可找到試液的濃度。同時根據工作曲線的線性情況,可確定試液的濃度范圍上限。
2.直接比較法
試樣和標樣溶液的濃度比=(試樣熒光值-試樣本底熒光值)/(標樣熒光值-標樣本底熒光值)
直接比較法簡單快速,它要求被測樣品 濃度與其相應的熒光值必須處于線性范圍內。
3.內標法
試樣和標樣溶液的濃度比=(試樣熒光值-試樣本底熒光值)/(試樣加標樣的混合溶液熒光值-試樣熒光值)
用內標法時,由于試樣和標樣的熒光值 是在相同體系中測定的 ,因此可消除試樣中 某些雜質熒光的干擾 。
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