賽默飛高效液相色譜 （HPLC） 是柱色譜的一種形式，它在高壓下將溶劑中的樣品混合物或分析物（稱為流動相）泵送通過帶有色譜填料（固定相）的色譜柱。樣品由氦氣或氮氣的移動載氣流攜帶。HPLC 能夠分離和鑒定任何樣品中存在的化合物，這些化合物可以以低至萬億分之一的痕量濃度溶解在液體中。由于這種多功能性，HPLC 被用于各種工業和科學應用，例如制藥、環境、法醫學和化學品。

柱色譜
柱色譜中的固定相通常是細小的吸附劑固體；能夠在其外表面上保持氣體或液體顆粒的固體。柱色譜中通常使用的色譜柱看起來類似于巴斯德移液器（巴斯德移液器用作小規模柱色譜中的色譜柱）。首先用玻璃棉或多孔板塞住色譜柱的狹窄出口，以支撐色譜柱填充材料并防止其從管子中逸出。然后將吸附劑固體（通常是二氧化硅）緊密地裝入玻璃管中，制成分離柱。必須小心地將固定相填充到玻璃柱中，以形成材料的均勻分布。吸附劑的均勻分布對于盡量減少柱內氣泡和/或通道的存在很重要。為完成色譜柱的制備，將用作流動相的溶劑通過干燥的色譜柱。然后稱該柱是“潤濕的”，并且在整個實驗過程中該柱必須保持濕潤。正確準備色譜柱后，將要分離的樣品放置在濕柱的頂部。可以在鏈接中找到填充分離柱的照片。

組件
色譜法是有效的，因為混合物中的不同組分會以不同的程度被吸引到固定相的吸附劑表面，這取決于每種組分的極性及其*的結構特征，以及它與流動相的相互作用。使用柱色譜實現的分離基于與樣品相關的因素。因此，與對流動相具有更高親和力的組分相比，更容易被固定相吸引的組分將以更慢的速率向下遷移到分離柱。此外，分離效果取決于所用吸附劑固體的性質和流動相溶劑的極性。

固定相
用作固定相的吸附材料類型對于有效分離混合物中的組分至關重要。可以使用幾種不同的固體。可以根據固體的粒度和活性來選擇吸附材料。吸附劑的活性用其活性等級表示，活性等級是吸附劑對樣品溶液中溶質吸引力的量度。具有高活性等級的固體是*無水的那些。硅膠和氧化鋁是常用的吸附劑。氧化鋁非常適合需要特定條件才能充分分離的樣品。但是，使用非中性固定相時應非常謹慎，氧化鋁固定相中 pH 值的升高或降低可能會導致混合物組分內發生化學反應。然而，硅膠的活性不如氧化鋁，通常可用作溶液中大多數組分的吸附劑。二氧化硅它具有高樣品容量，使其成為受歡迎的吸附材料。

流動相
還必須選擇合適的流動相，以便更好地分離未知混合物中的組分。該洗脫液將根據其相對于樣品和固定相的極性進行選擇。使用強極性吸附劑固定相（如氧化鋁）時，用作流動相的極性溶劑會被固定相吸附，這可能會置換混合物中的樣品分子，并可能導致樣品組分的洗脫變化很快。這將提供很少的樣品分離，因此好用較低極性的溶劑開始洗脫，首先洗脫固定相上弱吸附的組分。也可以在分離過程中改變溶劑以改變極性，從而更及時地分別洗脫各種組分。高效液相色譜(HPLC)。

     快速色譜儀器通過對溶劑施加壓力來使流動相通過色譜柱，以便更快地獲得結果。然而，在快速色譜法中，僅對溶液內的系統施加中等壓力。在 HPLC 中，高性能泵可以在色譜柱中施加高達 5000 psi 的壓力。