魚飼料中氨基酸的高效液相色譜（hplc）檢測方案　
隨著我國飼料工業的發展，魚粉的需要量逐年增加，魚粉的質量問題越來越引起飼料行業、養殖業的重視。魚粉是水產飼料的主要蛋白源，尤其含有動物生長所必需的氨基酸，由于魚粉用量大，價格高，有些廠家摻雜使假、以次充好，使魚粉質量參差不齊，這一行為業給魚粉品質分析帶來了一定困難。因此，有必要建立一個有效的手段對魚粉中氨基酸進行定量分析。

隨著我國飼料工業的發展，魚粉的需要量逐年增加，魚粉的質量問題越來越引起飼料行業、養殖業的重視。魚粉是水產飼料的主要蛋白源，尤其含有動物生長所必需的氨基酸，由于魚粉用量大，價格高，有些廠家摻雜使假、以次充好，使魚粉質量參差不齊，這一行為業給魚粉品質分析帶來了一定困難。因此，有必要建立一個有效的手段對魚粉中氨基酸進行定量分析。

以下是譜祥利用LC高效液相色譜儀對魚粉進行的HPLC檢測方案。

    1、儀器與試劑

    1.1儀器、設備
   高效液相色譜儀
   SMA 色譜柱AA：250mm×4.6mm×5μm
    分析天平
    恒溫箱，溫度控制在110±1℃
    微量進樣器，（20μL）一支
    漩渦混勻器
    氮吹儀
    針頭過濾器
    微孔濾膜：0.45µm

    1.2試劑
    鹽酸溶液，6mol/L:將優級純鹽酸與水按1:1(V/V)混合。
    氨基酸標準工作溶液。
    乙腈，色譜純。
    三水合醋酸鈉，優級純。
    冰醋酸。
    正己烷，色譜純。

    2、供試品溶液和對照品溶液的制備

    對照品溶液的制備   取氨基酸混合工作標液500ul，用水稀釋至5ml，即得。

　　供試品溶液的制備   稱取試樣50-100mg（準確至0.1mg）于據塞試管中，加入6.0mol/l鹽酸10ml，混勻，充分提取10min，蓋緊蓋子。將樣品置于110℃恒溫干燥箱中，水解22-24h。冷卻后充分混勻，過濾。根據實驗要求移取適量上清液，60℃下氮氣吹干，備用。以下按照衍生方法包進行。

　　方法包衍生方法：將恒溫水浴鍋預熱至50±1℃，分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋至原來濃度的1/5倍。精密量取上述對照品1ml，至于試管中，加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml，搖勻；在50±1℃的水浴中加熱45分鐘，取出，加入正己烷溶液1ml，振搖；并用孔徑為0.45μm有機膜過濾，放置30min后，取澄清的下層液進行分析實驗。供試品的衍生步驟與對照品相同。

    3、色譜條件
　色譜柱：AA  4. 6 mmx250 mm，粒度5 µm

    流動相：
    流動相A：0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH6.5）：乙腈=93:7
    配置方法：準確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中，攪拌均勻，溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調節pH值至6.5； 準確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml，混合均與，抽濾，過0.45μm濾膜。
    流動相B：水：乙腈=20:80。

    配制方法：準確量取水100ml和乙腈400ml，混合均勻，抽濾，過0.45μm濾膜。
    波長：254nm
   流速：1. 0 mL/min

　梯度設置：

4、測定法
　　分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得

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